HUH28人胆管癌传代形式细胞

HUH28人胆管癌传代形式细胞	
【细胞货号】	C0636
"选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。
瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ HUH28人胆管癌传代形式细胞解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后，将血清放入，待温度升高到56℃后计时，一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显着增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清包括不同批次对细胞的影响。【细胞缩写】"	HUH28细胞
【细胞名称】	HUH28(人胆管癌细胞)
【背景资料】	见细胞说明书
【细胞来源】	细胞主要来源ATCC、*Z、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外着名大学建系
【代次】	P4
【规格】	复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
"细胞冻存及复苏基本知识普及：
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。
除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二亚砜DMSO，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。 
采用""慢冻快融""的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入内-196℃。【细胞数】"	1*10（6）
【生物*级别】	1
【生物体】	人
【组织来源】	肝
【细胞形态】	上皮细胞样
【细胞特性】	贴壁
【细胞活力】	95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
【细胞检测】	细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
"细胞常规培养传代流程请严格遵照无菌操作
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞注意把握消化时间，通常控制在1-2min
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时不建议消化到细胞漂浮去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液每周2-3次，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养
1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，原瓶培养基的继续使用时间较长不宜**过72小时
2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请**选择直径6cm的培养皿进行传代培养
3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。【培养条件】"	详见细胞说明书
【传代方法】	建议1:2-1:3 两天换液一次
【冻存条件】	详见细胞说明书
【主要文献】	请具体查阅相关发表文章
细胞培养相关培养基选购基本指南：
如何选择培养基：经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。为什么这样说呢?如果这种细胞是购自一些细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。
培养基这么多种，要选择起来也是个头疼的事情。除了部分培养基是公开配方的，或者是专门针对某一种细胞的，如昆虫基本培养基和神经祖细胞基础培养基， 但是大部分液体培养基都是**配方的，也就是说其中的成分是保密的。那么你只能是检索文献、让供应商推荐，然后用自己的细胞做几次传代培养来选出较合适的培养基。毕竟实践出真知。
怎么样才可以买到好的培养基产品：HUH28人胆管癌传代形式细胞首先，当然需要找对品牌，其次是找对自己所在区域的品牌代理商，针对自己所养的细胞，咨询供应商该选用哪种的培养基进行培养，这样就可以买到好的而且适合自己的培养基产品。
关于培养基品牌，目前公司所知道的高校实验室有些同学在用Corning系列培养产品，也有同学在用Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)等品牌的产品。
培养基的选择和使用
MEM：成分简单，贴壁细胞可以选择。
DMEM：分高糖型和低糖型。
IDMEM：适合细胞密度低，生长困难的细胞。如杂交细胞的筛选，DNA转染后转化细胞的筛选培养。
RPM1640：应用较广泛的培养基之一。悬浮细胞培养可以选择，主要针对淋巴细胞，也适合其他细胞。
199、109培养基：成分齐全，培养效果较好。
F10培养基：适合小鼠及人类二倍体细胞培养。
F12培养基：适合单细胞分离培养及无血清培养。
McCoy’s5A培养基：特别适合原代细胞及较难培养细胞的生长。
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